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人腎損傷分子 1(Kim-1)檢測試劑盒(ELISA)說明書

發布時間:2022-09-21   點擊次數:165次

人腎損傷分子 1(Kim-1)檢測試劑盒(ELISA)說明書本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人腎損傷分子1(Kim-1)水平。用純化的人腎損傷分子1(Kim-1) 捕獲抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被的微孔中依次加入人腎損傷分子1(Kim-1),再與HRP標記 的檢測抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化 下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人腎損傷分子1(Kim-1)呈正 相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人腎損傷分子1(Kim-1) 含量。

產品組成:

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試劑盒性能: 1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數 R 值為 0.95 以上。 

2.批內變異系數與批間變異系數應分別小于 10%和 15% 。 

檢測范圍: 0.25 ng/mL - 8 ng/mL 

靈敏度: 檢測濃度小于 0.1 ng/mL

1. 嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫 20-25℃。

使用后立即冷藏保存試劑。

2. 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干

燥掉。

3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響 OD 值。

4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色,已經變藍的底物液不能使用。

5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。

6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。

7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應

試劑的生物活性。

9. 不能使用過期產品。

10. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應管理好,按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。

試劑準備:

試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡后方可使用。

20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。2021

操作步驟:

1. 標準品的加樣:設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品 50μL;。

2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標

包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣品最終稀釋度為 5 倍)。

加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3. 加酶:每孔加入酶標試劑 100μl,空白孔除外。

4. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 60 分鐘。

5. 配液:將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用。

6. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復 5 次,拍

干。

7.

顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色 15 分鐘.

8. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

測定:以空白孔調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(

OD 值)。 測定應在加終止液后 15 分鐘以

內進行。


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